表面等離子體共振顯微鏡(SPRm 200)
2023-07-24
表面等離子體共振顯微鏡-SPRm 200 系列為免標(biāo)記研究分子相互作用的領(lǐng)域開辟一個(gè)嶄新的前沿。專門針對(duì)細(xì)胞膜蛋白和相關(guān)分子免標(biāo)記檢測(cè)而設(shè)計(jì)的SPRm 200, 使您在不需要從細(xì)胞中提取和分離膜蛋白的前提下實(shí)時(shí)觀察細(xì)胞結(jié)構(gòu)并同時(shí)測(cè)量藥物和靶點(diǎn)在細(xì)胞上的結(jié)合過程。還可進(jìn)行對(duì)藥物和在天然狀態(tài)下的膜蛋白之間相互作用的測(cè)量。
1. SPRm 200的主要功能
實(shí)時(shí)定量活細(xì)胞分子相互作用
單個(gè)細(xì)胞/多個(gè)細(xì)胞動(dòng)力學(xué)定量分析(Ka,Kd,KD)及統(tǒng)計(jì)分布
明場(chǎng)成像、SPR成像結(jié)合單點(diǎn)動(dòng)力學(xué)分析
生物標(biāo)記檢測(cè), 藥物靶向研發(fā)
小分子免標(biāo)分析(<200Da)
電化學(xué)同步分析
小分子、DNA、抗體、肽段、蛋白、病毒、細(xì)菌、細(xì)胞分析
2. SPRm 200技術(shù)特點(diǎn)
細(xì)胞原位:真正實(shí)現(xiàn)細(xì)胞層面的原位分子互作,無需提純,可以直接原位分析藥物在細(xì)胞層面與分子互作,尤其為膜蛋白受體(糖蛋白、GPCR)等提供了研究解決方案;
通量:SPR視場(chǎng)600um*600um,可以同時(shí)進(jìn)行多個(gè)細(xì)胞與分子互作的研究,從而實(shí)現(xiàn)藥物統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,和細(xì)胞異質(zhì)性研究。
精度:良好靈敏度,可以實(shí)現(xiàn)<200Da 小分子藥物與細(xì)胞的互作研究
高分辨動(dòng)態(tài)可視化:可以動(dòng)態(tài)可視化觀察藥物分子與細(xì)胞反應(yīng)的全過程及成像,同時(shí)可以得到定量的SPR分析曲線,從而得到定量Ka、Kd、KD。
3. SPRm 200的應(yīng)用
3.1 基于原位細(xì)胞分子互作的研究
3.1.1 小分子藥物
常用藥物中,小分子藥物可占總量98%,小分子藥物通常是信號(hào)傳導(dǎo)抑制劑,它能夠特異性地阻斷腫瘤生長(zhǎng)、增殖過程中所必需的信號(hào)傳導(dǎo)通路,從而達(dá)到治療的目的。多通過濃度梯度提供動(dòng)力被吸收。
①小分子藥物與HEK 293細(xì)胞GPR39受體相互作用
②小分子藥物與細(xì)胞ASIC 酸敏感離子通道受體相互作用研究
3.1.2 抗體藥物
單克隆抗體(mAb)療法已成為治療癌癥、自身免疫性疾病、哮喘和許多其他疾病的既定方法。單克隆抗體(mAb)藥物占整個(gè)生物制藥50%的份額,其中超過60%都是膜蛋白受體。SPRm200可以在單細(xì)胞層面定量研究單克隆抗體(mAb)和膜蛋白結(jié)合作用。傳統(tǒng)SPR是直接將純化的蛋白固定在芯片表面,對(duì)于膜蛋白而言是有問題的,膜蛋白從細(xì)胞環(huán)境中提取并保持自身形態(tài)非常困難。
3.2 基于病毒、細(xì)菌載體分子互作的研究
3.2.1 快速ASTs實(shí)驗(yàn):抗生素與大腸桿菌代謝活性研究
ASTs實(shí)驗(yàn)是確定抗生素易感性和細(xì)菌菌株耐藥性的重要實(shí)驗(yàn)。目前大多數(shù)AST實(shí)驗(yàn)是基于細(xì)胞培養(yǎng),需要幾天時(shí)間才能完成??焖貯ST檢測(cè)可以降低發(fā)病率死亡率和幫助制定早期窄譜抗生素治療方案。通過SPRm200,我們使用等離子成像和PIT技術(shù)跟蹤單個(gè)細(xì)菌細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)。監(jiān)測(cè)隨著細(xì)胞代謝和抗生素的投入的Z向變化??梢钥吹?,抗生素可以明顯減弱細(xì)菌細(xì)胞的活動(dòng),并且可以定量計(jì)算,從而成為快速AST檢測(cè)方法。
3.2 基于SPRm200,病毒載體微陣列研究多種不同GPCR受體與配體的相互作用的研究
3.2.1 SPRM電化學(xué)阻抗方法定量檢測(cè)分子互作
通過電化學(xué)SPRM阻抗分析,測(cè)量了傳感器表面病毒肽配體和不同GPCR受體的結(jié)合動(dòng)力學(xué)常數(shù)。